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基因科技提升产业竞争力

mRNA/lncRNA荧光定量

mRNA 存在于原核生物和真核生物的细胞质及真核细胞的某些细胞器中,携带遗传信息,在蛋白质合成时充当模板的RNA。信使RNA从脱氧核糖核酸(DNA)转录合成的带有遗传信息的一类单链核糖核酸(RNA)。它在核糖体上作为蛋白质合成的模板,决定肽链的氨基酸排列顺序。mRNA的表达对于生物体内的生命活动有着极为重要的作用,因此对mRNA的表达检测是在许多研究中必要的。实时定量PCR由于其灵敏度高、方便,快速等特点,成为检测mRNA表达情况的一个常用技术。

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA,其本身并不编码蛋白或少编码蛋白质,但能够通过参与细胞内多种过程调控,在表观遗传调控、细胞周期调控和细胞分化调控等众多生命活动中发挥重要作用,成为继miRNA之后的新研究热点。

服务项目

mRNA
实时定量PCR表达检测
lncRNA
实时定量PCR表达检测


运用成熟的实时定量检测技术,结合目标mRNA/ lncRNA的特点设计特异性引物,保证扩增的特异性和准确性,提供稳定的检测结果。

技术路线

mRNA表达量检测



技术特点:

真核生物的mRNA逆转录可以采取使用Oligo(dT)为引物的方法,原核生物的mRNA逆转录可使用随机引物。在真核生物RNA质量不佳时,可同时使用Oligo(dT)和随机引物进行反转录。后根据序列特点直接设计相应的通用引物和特异性TaqMan探针即可。


真核生物mRNA反转录示意图




IncRNA表达量检测




技术特点:

lncRNA与mRNA不同,可能具备polyA尾巴也可能不具有,因此在逆转录lncRNA的时候,统一使用随机引物进行扩增。后根据序列特点直接设计相应的通用引物和特异性TaqMan探针即可。除常规TaqMan探针以外,用户还可选择设计合成TaqMan-MGB探针,其探针设计得更短,可使得探针设计的成功率大为提高。


目的lncRNA的熔解曲线图 (仪器为Thermo Fisher Q6)

收样要求

组织
>300mg 新鲜动植物样本,≥100mg叶片样本等
细胞
>106个悬浮/贴壁细胞
血液
>1ml全血/全血分离的有核细胞

RNA

针对mRNA:总RNA >1μg,体积>20μl,浓度> 50 ng/μl

针对lncRNA:总RNA>4μg,体积≥20μl,浓度≥200 ng/μl

您可以得到的数据分析

mRNA荧光定量
引物(或探针)及序列,扩增曲线,熔解曲线(SYBR Green方法)、数据分析结果报告。

lncRNA荧光定量

引物(或探针)及序列,扩增曲线,熔解曲线(SYBR Green方法)、数据分析结果报告。

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