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专家采访

当110遇到脱发嫌疑人——毛干可以提DNA吗?

【2019-04-26】

你 工作精神压力过大吗?

经常熬夜?内分泌失调?营养不良?


你,有脱发困扰吗?


       随着工作及生活压力的增加和饮食习惯的改变,“脱发”年龄提早不仅大势所趋,甚至还有愈演愈烈的趋势。这个“社会现象”连在刑侦和司法鉴定体系都有体现,更多的毛发检材被送往实验室。


       甚至….



       毛发作为一种易发现、易取得、易储存并且易运输的常见检材,无论在司法鉴定或是刑侦体系中都常与它打交道。当面对毛发检材,如何从毛发中提取出足量的DNA是日常工作中普遍遇到的问题。更何况,现场取得的毛发检材,大多数来自自然脱落或断发。这类毛发检材相比于新鲜拔取的毛发,处理难度级别可以说高了不只一个人参(编注:人参很难)


       在讨论这个问题之前,我们首先了解下毛发的结构:毛发整体分为毛囊和毛干2部分,毛囊包括皮脂腺、毛球等;毛干则由毛小皮、毛皮质和毛髓质组成。脱发是由于毛囊处于休止期或坏死,因此,脱落的毛发上所带的毛囊组织很少。而如果是断发则仅有毛干组织。


上为毛发结构图,下为毛发生长周期,自然脱发是处于休止期



  如何对毛发进行DNA提取  


       对检材进行DNA提取时,首先考虑的是检材上是否有DNA或者哪个部分有DNA。因此,首先我们需要清楚DNA所在的位置。

 

       正常毛发(正常脱落毛发、无烫染)中的DNA主要存在于毛囊位置,由于毛囊部分具有丰富的腺体细胞及皮肤细胞,故具有毛囊的毛发DNA提取成功率较高。而毛干与此相反,毛干的毛小皮及毛皮质的主要组成分为角蛋白纤维,髓质层与皮质层中含有大量色素,因此具有携带核DNA的细胞少之又少。同时通过查询相关文献,毛干中可提取DNA的区域至今尚不明确。部分研究学者认为髓质中存在少量核DNA,也有国外研究学者认为毛干提出的核DNA主要存在于外部角质层。


       从另一个角度,毛干中的线粒体DNA相对于核DNA来说,含量很大。线粒体DNA常被用于母系亲缘关系鉴定(线粒体研究对医学的贡献远超你的想象),在无毛囊或毛囊已败坏而毛发样本又很难得的情况下,这种鉴定也具有较高的价值。


       目前法医DNA实验室是如何对毛发进行有效的DNA提取呢?常见使用的方法分为5种:


有机溶剂提取法;

Chelex 100处理法;

商品试剂盒处理;

PCR缓冲液加蛋白酶K速提;

组合方法:如“经典有机溶剂法”结合“纳米磁珠法”等。


       阅微基因的微略DNA提取试剂盒提取毛发DNA方法采用的就是第五种方法——强效裂解缓冲液、蛋白酶K、DTT搭配超顺磁珠,可有效提取纯化DNA,减少PCR抑制剂存留



使用微略DNA提取试剂盒提取毛发DNA

——超顺畅柔滑的使用体验



  试剂盒使用方法  


1  取适量带毛囊毛发(自然脱落毛发亦可),取毛囊部位放入2.0mL离心套管,加入消化缓冲液100μL,蛋白酶K 10μL,DTT 4μL,56℃消化15min,加入裂解结合液300~ 400μL,99℃加热15min,12,000g离心2min,弃套管与载体,收集离心管中液体。注意:如果发现离心管底有沉淀(沉渣),用移液器将上清小心转到另一离管。毛发相对其他检材DNA含量较少,如果需得到尽可能多DNA,可以补加蛋白酶K,延长消化时间至组织完全。


2  将磁珠混匀后,于收集液中加入磁珠20μL,涡旋混匀,放入翻转摇匀仪吸附15min。


3  将离心管放置到磁性架上吸附1min,吸弃上清。


4  加入漂洗液500μL,涡旋混匀,将离心管放置到磁力架上吸附1min,吸弃上清 。


5  重复步骤4一次。注意:最后漂洗环节尽可能将液彻底吸弃,防止乙醇难以完全挥干影响PCR扩增。


6  60°C干燥磁珠 2~5min至管中液体完全消失。

7  加入20~300μL洗脱液,涡旋混匀,56°C孵育15min。磁性架分离,上清即为DNA,-20°C保存 。说明:洗脱液的用量应根据检材条件和PCR需要适当选用。


参考文献:

管政、陈爱亮.毛干DNA提取方法概述[J].中国生物工程杂志.2012.32(10):128-134.

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