2022全国病理技术会议：如何选择MMR与MSI检测策略？如何做到MSI规范化检测？
2023年3月16-18日，2022年全国病理技术会议于广州盛大召开。会议邀请国内知名专家学者围绕常规组织处理与切片制备、特殊染色与组织化学技术、免疫组化技术及新进展、分子病理技术、病理技术质量控制、实验室信息化建设与管理等内容进行专题发言和讨论。
病理技术的发展给患者带来了全新的治疗希望。分子病理诊断可为肿瘤患者提供精准治疗依据，而精准的分子病理诊断依赖规范化的分子病理检测与解读。本次会议期间，南方医科大学南方医院病理科李红老师围绕微卫星不稳定（MSI）/错配修复（MMR）检测方法及质控要点做了详尽介绍。
总体上，研究表明，约10%的CRC患者存在MSI-PCR和MMR-IHC检测结果不一致的情况，从而会对患者治疗选择产生影响。
■ dMMR/MSS的可能原因：MMR系统存在功能补偿，使MSS状态不变，常见的补偿机制为PMS2和PMS1互补，MSH6和MSH3互补；新辅助治疗导致的MSH6表达缺失或PMS2表达较弱；MLH1启动子甲基化可解释多数MLH1蛋白缺失但MSS的现象。
李红老师：目前MSI检测方法包括荧光PCR-毛细管电泳法以及NGS法，检测位点涉及单核苷酸重复位点及双核苷酸重复位点。《结直肠癌及其他相关实体瘤微卫星不稳定性检测中国专家共识》明确指出PCR毛细管电泳法是MSI检测的“金标准”，基于 PCR法中的Pentaplex panel的5~7个标志位点组合 BAT25、BAT26、NR21、NR22、NR24、NR27和 MONO27被认定为 PCR MSI检测的“金标准”。同时，NCCN、ESMO也联合推荐敏感性与特异性更佳的单核苷酸检测位点。美国病理学会CAP发布的MSI室间质评数据显示，2012年选择单核苷酸位点的实验室超过70%。我国自主研发的6个单核苷酸检测Panel（Bat 25，Bat 26，NR 21，NR 24，NR 27，MONO 27），在MSI检测过程中，为防止扩增产物污染，使用了UDG酶防污染体系、为避免样本间相互污染和样本混杂，设置了包括性别位点和个体识别位点在内的两类质控位点、在每一次MSI检测时使用分子量内标、并同时检测同一个患者的的正常对照组织，多重质控，保证了MSI检测结果的准确性。注册遵从《MSI检测试剂临床试验注册审查指导原则》，经过国内3家顶级肿瘤医院1000多例的临床数据验证，与MMR-IHC伴随诊断产品相比总符合率达97.25%。
NGS检测MSI的基本原理是：通过刻画选取的MSI位点不同重复序列长度对应的reads数在MSI-H和MSS中的差异来判断位点的不稳定状态 ,以不稳定位点比例是否超过既定阈值来确定样本的MSI 状态。MSI检测的主流算法包括mSINGS、Misensor和MANTIS等，不同阈值、用于分析的微卫星位点的数量以及检测癌种均会影响算法检测的准确性。国内尚无NMPA批准的用于MSI检测的NGS panel，且MSI位点选择，标准算法等均未统一。2022年CAP指南指出结肠癌、胃食管癌、小肠癌患者，在使用PD-1/PD-L1抑制剂时优先使用MMR-IHC/MSI-PCR，而不是NGS。NGS虽具有可同时捕获多段基因组序列、提高分子诊断效率、降低样本用量的优点，但是同样面临着检测技术复杂、不易标准化、需要大样本的验证以及价格昂贵的不足。
南方医科大学南方医院病理科主管技师，广东省基层医药学会细胞病理与分子病理专业委员会委员、从事结直肠癌、肺癌等肿瘤发生及转移相关分子机制的研究，先后以第一作者身份发表科研论文多篇。
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