CAR-T细胞治疗产品将CAR基因整合到宿主基因组中，这可能会导致关键基因突变或激活原癌基因，从而导致恶性肿瘤风险增加。需对潜在的插入突变、致瘤/致癌性风险进行评估，对基因整合位点进行分析，关注肿瘤相关调控基因附近有无优先整合迹象及整合位点的细胞有无优先异常增殖。
简介
CAR-T细胞在体外改造过程中使用逆转录病毒或慢病毒载体将CAR序列插入患者T细胞基因组中。但由于病毒载体介导的基因序列插入具有随机性和不可预测性，从而可能影响插入位置周边基因的正常表达， 甚至激发原癌基因，引发不受控制的细胞增殖与克隆。Linker-Mediated (LM-PCR)方法基于高通量测序平台， 结合慢病毒LTR特异引物巢式PCR技术，可通过分析整合位点侧翼的 DNA序列，在全基因组层面上寻找病毒插入位置信息。
对于病毒载体插入位置风险评估，美国FDA在多篇指导意见中提出对本项检测的要求。我国CDE在2021年颁布的《基因治疗产品非临床研究与评价技术指导原则（试行）》、《基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）》、《基因治疗产品长期随访临床研究技术指导原则》中亦对基因组整合相关风险评估提出了明确要求。
技术路线
项目优势
■ 全基因组层面精准富集
■ 3’LTR+5’LTR同时检测，相互补充
■ 单克隆、寡克隆和临床样本全面进行方法学验证
■ 多样性分析内容满足申报需求
测序策略
| 测序策略 | PE150 |
| 数据量 | 5'LTR+3'LTR：各3G |
收样要求
|
全血 |
不少于2ml |
| 细胞 | 不少于1x106 |
| DNA | 不少于2ug |
部分结果展示
参考资料
1.《基因治疗产品非临床研究与评价技术指导原则（试行）》. 2021年版
2.《基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）》. 2021年版
3.《基因治疗产品长期随访临床研究技术指导原则》. 2021年版
4.《Long Term Follow-Up After Administration of Human Gene Therapy Products》2020年版
2.《基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）》. 2021年版
3.《基因治疗产品长期随访临床研究技术指导原则》. 2021年版
4.《Long Term Follow-Up After Administration of Human Gene Therapy Products》2020年版
