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DNA甲基化检测服务

DNA甲基化检测服务

DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一,真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'-端的胞嘧啶转变为5'-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰方在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。脊椎动物DNA的甲基化状态与生长发育调控密切相关,比如在肿瘤发生时,抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加, CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态,导致抑癌基因表达的下降。阅微基因通过以下方法提供甲基化检测服务。

服务项目

1、甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。


2、亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-克隆测序法。


3、甲基化敏感扩增多态性
(Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)
MSAP是利用对DNA甲基化敏感的两种同裂酶Hpa II和Msp I来对基因组DNA进行酶切和连接。由于两种酶能够识别相同的限制性酶切位点,即CCGG位点。当DNA序列中的CCGG位点出现不同程度的甲基化状态时,会分别被这两种酶识别,以有无产物的方式体现出来。


4、焦磷酸测序(Pyrosequencing)

通过准确定量单个连续的CpG 位点上的甲基化频率,焦磷酸测序能检测并定量甲基化水平上的细微改变。在序列延伸过程中,根据C和T的掺入量来定量确定单个位点的C-T比例。因此,不同位点的甲基化变异就能被准确检测。由于焦磷酸测序提供了真实的序列数据,甲基化状态也就以序列形式呈现。

服务编号

送样要求

细胞(≥106个)、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,基因组DNA(体积≥20μl,浓度≥50 ng/μl)。

提供结果

成功案例

某客户检测病例组样本启动子区域甲基化情况,该区段共有39个CpG位点,一共提供10个克隆,该样本的甲基化程度为2.3%。

SP检测CpG甲基化区段点状图结果示例


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